Sviluppo di un metodo ELISA indiretto per il rilevamento dell'anticorpo IgG contro il coronavirus della sindrome da diarrea acuta suina basato sulla proteina spike ricombinante

Il coronavirus della sindrome da diarrea acuta suina (SADS-CoV) è un coronavirus patogeno enterico suino recentemente scoperto che può causare diarrea acquosa nei suinetti appena nati e causare perdite economiche significative all'industria suinicola.Al momento, non esiste un metodo sierologico adatto per valutare l'efficacia dell'infezione e del vaccino SADS-CoV, quindi è urgente utilizzare un efficace test di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) per compensare questa carenza.Qui, un plasmide ricombinante che esprime la proteina spike (S) SADS-CoV fusa con il dominio Fc IgG umano è stato costruito per produrre baculovirus ricombinante ed espresso nelle cellule HEK 293F.La proteina S-Fc viene purificata con resina proteica G e mantiene la reattività con anticorpi anti-Fc umani e anti-SADS-CoV.Quindi la proteina S-Fc è stata utilizzata per sviluppare ELISA indiretto (S-iELISA) e ottimizzare le condizioni di reazione di S-iELISA.Di conseguenza, analizzando il valore OD450nm di 40 sieri negativi per SADS-CoV confermati dal test di immunofluorescenza (IFA) e dal Western blotting, il valore di cut-off è stato determinato in 0,3711.Il coefficiente di variazione (CV) dei 6 sieri positivi per SADS-CoV all'interno e tra le sessioni di S-iELISA era inferiore al 10%.Il test di reattività crociata ha mostrato che S-iELISA non ha reattività crociata con altri sieri di virus suino.Inoltre, sulla base del rilevamento di 111 campioni di siero clinici, il tasso complessivo di coincidenza di IFA e S-iELISA è stato del 97,3%.Il test di neutralizzazione del virus con 7 diversi valori di OD450nm di siero ha mostrato che il valore di OD450nm rilevato da S-iELISA era positivamente correlato al test di neutralizzazione del virus.Infine, S-iELISA è stato eseguito su 300 campioni di siero di allevamento di suini.I kit commerciali di altri enterovirus suini hanno mostrato che i tassi di IgG positivi di SADS-CoV, TGEV, PDCoV e PEDV erano rispettivamente dell'81,7%, 54% e 65,3%., 6%, rispettivamente.I risultati mostrano che l'S-iELISA è specifico, sensibile e riproducibile e può essere utilizzato per rilevare l'infezione da SADS-CoV nell'industria suinicola.Questo articolo è protetto da copyright.tutti i diritti riservati.